Die Sicherheit von L-5-MTHF-Ca wurde durch Tests auf Genotoxizität sowie subchronische und pränatale Entwicklungstoxizität bewertet. In In-vitro-Tests war L-5-MTHF-Ca nicht mutagen und löste keine anderen chromosomalen Ereignisse aus. 

L-5-MTHF-Caist weder teratogen noch embryotoxisch. Basierend auf den Ergebnissen der In-vitro- und In-vivo-Studien wird die sichere Verwendung von L-5-MTHF-Ca als Zutat in Lebensmitteln unterstützt. Der Wert ohne beobachtete schädliche Wirkung war die höchste Dosis in der Studie zur subchronischen Toxizität, d. h. 400 mg/kg Körpergewicht/Tag für männliche und weibliche Ratten.

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